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分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用試劑配制
  • 更新日期:2023-04-11      瀏覽次數(shù):536
    • 一. 常用貯液與溶液

      1mol/L亞精胺(Spermidine): 溶解2.55g亞精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。

      1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。

      10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):將77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。

      10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(組分V或分子生物學(xué)試劑級,無DNA酶)于9.5ml水中(為減少變性, 須將蛋白加入水中,而不是將水加入蛋白),蓋好蓋后,輕輕搖動,直至牛血清蛋白完quan溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。

      1mol/L二硫蘇糖醇(DTT):在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水,分成小份貯存于-20℃?;蜣D(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇 至微量離心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。

      8mol/L乙酸鉀(potassium acetate):溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中,加水定容到100ml。

      1mol/Llv化鉀(KCl):溶解7.46glv化鉀于足量的水中,加水定容到100ml。

      3mol/L乙酸鈉(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中,用冰乙酸調(diào)溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。

      0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三鈉鹽?;蚍Q取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。

      1mol/L HEPES:將23.8gHEPES溶于約90ml的水中,用NaOH調(diào)pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。

      1mol/L HCl:加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。

      25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(異丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份貯存于-20℃。

      1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2•6H2O于足量的水中,定容到100ml。

      20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,輕輕搖動,直至蛋白酶K完quan溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。

      10mg/mlRnase(無DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl調(diào)pH至7.5,于-20℃貯存。(配制過程中要戴手套)

      5mol/L氯化鈉(NaCl):溶解29.2g氯化鈉于足量的水中,定容至100ml。

      10N氫氧/化鈉(NaOH):溶解400g氫氧/化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中(磁力攪拌器攪拌),氫氧/化鈉完quan溶解后用水定容至1L。

      10%SDS(十二烷基硫酸鈉):稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中,用磁力攪拌器攪拌直至完quan溶解。用水定容至1L。

      2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使終體積為100ml。

      2.5% X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用鋁箔包裹裝液管,貯存于-20℃。

      100×Denhardt試劑(Denhardt’s regent) 成分及終濃度 配制100ml溶液各成分的用量

      2%聚蔗糖(Ficoll,400型) 2%聚乙/烯吡/咯烷酮(PVP-40) 2%BSA(組分V)

      水 2g 2g 2g

      加水至總體積為100ml ,依照上表稱取各組分,溶于水中定容。過濾除菌及雜質(zhì),分裝成小份于-20℃貯存。

      10×標(biāo)準(zhǔn)DNA連接酶緩沖液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端連接) 成分及終濃度 配制10ml溶液各成分的用量 0.5mol/L Tris-HCl:5ml1mol/L 貯液 ,100mmol/L MgCl2:1ml 1mol/L 貯液,100mmol/L DTT:1ml 1mol/L 貯液,2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L 貯液,5mmol/L 鹽酸亞精胺(可選):50ul 1 mmol/L 貯液,0.5mg/ml BSA(組分V)(可選):0.5ml 10 mg/mL 貯液 ,水: 2.25ml

      將配制好的緩沖液分裝成小份,貯存于-20℃ 。

      100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions) 可以購買到100mmol/L純dNTPs貯液,-80℃可貯存至少6個(gè)月。

      10mmol/L dNTP混合液 成分及終濃度 配制20ul溶液各成分的用量

      10mmol/L dATP

      10mmol/L dCTP

      10mmol/L dGTP

      10mmol/L dTTP

      水 2ul 100 mmol/L dATP 貯液

      2ul 100 mmol/L dCTP 貯液

      2ul 100 mmol/L dGTP 貯液

      2ul 100 mmol/L dTTP 貯液

      12ul

      20%PEG 8000/2.5M NaCl

      成分及終濃度 配制10ml溶液各成分的用量

      質(zhì)量濃度為20%聚乙二醇

      2.5mol/L 氯化鈉

      水 20g

      50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g 固體氯化鈉

      補(bǔ)足100ml

      加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中,加水至終體積100ml,用磁力攪拌器攪拌溶解。

      20×SSC

      成分及終濃度 配制1L溶液各成分的用量

      300mmol/L 檸檬酸三鈉(二水)

      3mol/L 氯化鈉

      水 88.2g

      175.3g

      補(bǔ)足1L

      溶解檸檬酸三鈉(二水)和氯化鈉于約0.9L水中,加幾滴10N NaOH溶液調(diào)pH為7.0,用水補(bǔ)足體積至1L。

      DEPC(焦碳酸2乙酯)處理水

      加100ul DEPC 于 100ml 水中,使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1%。在37℃溫浴至少12h,然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min,以使殘余的DEPC失活。DEPC會與胺起反應(yīng),不可用DEPC處理Tris緩沖液。

      甲酰胺(deionized formamide)

      直接購買或加Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中,用磁力攪拌器輕輕攪拌1h,可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1號濾紙過濾除去樹脂后分成小份,充氮?dú)庥?80℃貯存(防止氧化)。

      磷酸緩沖液(phosphate buffer)

      按照下表所給定的體積,混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉(單堿)和1mol/L 磷酸氫二鈉(雙堿)貯液,獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉(NaH2PO4•H2O)貯液:溶解138g于足量水中,使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉(Na2HPO4)貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。

      1mol/L 磷酸二氫鈉(ml) 1mol/L 磷酸氫二鈉(ml) 最終pH值

      TE(用于懸浮和貯存DNA)

      成分及終濃度 配制100ml溶液各成分的用量

      10mmol/L Tris-HCl

      1mmol/L EDTA

      水 1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0,25℃)

      200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)

      98.8ml

      Tris緩沖液(Tris-HCl buffer)

      將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中,再根據(jù)所要求的pH(25℃下)加一定量的濃鹽酸(11.6N),用水調(diào)整終體積至1L。

      濃鹽酸的體積(ml) pH